高親和力單克隆抗體制備問題及對策

一、單抗制備-骨髓瘤細胞SP2/0 培養過程中遇到的問題及對策

1，細胞長的慢或細胞死亡
正常生長情況下，細胞一天傳代一次，生長越好，貼壁越多
對策：①培養基配方不對；② 接種密度太低，低于10的4次方；③污染了支原體或者其他不明細菌，支原體的現狀是出現小黑點；細菌污染是渾濁；霉菌污染是出現白色肉眼可見菌落；不明細菌污染出現砂狀平鋪背景，視野發暗。④細胞瓶刷洗不干凈

2，細胞形態異常
正常生長情況下，細胞渾圓，透亮，成對數生長，生長越好，貼壁多，懸浮少
對策：①培養基配方不對；② 接種密度太低，低于10的4次方；③污染了支原體或者其他不明細菌，支原體的現狀是出現小黑點；細菌污染是渾濁；霉菌污染是出現白色肉眼可見菌落；不明細菌污染出現砂狀平鋪背景，視野發暗。④細胞瓶刷洗不干凈

單抗制備-細胞融合篩選過程中遇到的問題及對策

1，融合率低，陽性孔少
①免疫的問題。由于免疫原性不強或者免疫途徑不當造成免疫弱，效價低。
②融合過程中溫度、時間、PEG分子量，作用時間等。
③脾細胞是否取出了足夠多的細胞，有無組織碎片干擾。
④融合前骨髓瘤細胞生長狀態是否完好，細胞是否渾圓，透亮，成對數生長。

2，單抗親和力整體低
①免疫的問題。免疫途徑不當或者免疫原問題。
②融合細胞篩選過程出現遺漏，篩選方法不當或檢測方法不當，造成沒有篩到高親和力的融合細胞。
③由于亞克隆細胞生長環境不合適，導致融合細胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時就需要及時更換培養液，當細胞增長到一定密度的時候，培養基就開始變顏色，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失；控制好細胞的密度，密度過大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失；不要過于頻繁操作細胞，當細胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化。
操作細致，防止細胞被支原體等微生物污染。

3，抗體親和力從高變低
①沒有及時更換培養液，當細胞增長到一定密度的時候，培養基就開始變顏色，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失或者性狀改變。
②控制好細胞的密度，密度過大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失或者性狀改變。
③過于頻繁操作細胞，當細胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化。
④細胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數超過5次，導致細胞生長環境經常被改變，弱的陽性雜交瘤細胞染色體丟失或者性狀改變。

三、單抗腹水制備過程中遇到的問題及對策
1，腹水少或者無腹水產生
①致敏不正確，不正確的使用致敏劑，或者致敏時間與接種雜交瘤的時間相差太久，一般是7-14天，具體看小鼠的腹部情況。

②雜交瘤細胞或者致敏劑的接種位置不正確，沒有打到腹腔，而是打到了皮下。

③接種的雜交瘤細胞數量太少，太多或者細胞狀態不好。一般不50萬個細胞左右為宜。

④建議使用母鼠或者生育過的母鼠制備腹水。
2，腹水沒有效價

①制備腹水的雜交瘤極不穩定，打到小鼠身上之前就失去抗體分泌能力或者打到腹腔內就失去了分泌能力。

② 致敏小鼠時采用了錯誤的致敏劑。
 ③接種的雜交瘤細胞數量太少，或者細胞狀態不好。
④ 由于注射方式和部位錯誤，形成了實體瘤。